產氣腸桿菌PCR試劑盒屬于腸桿菌科腸桿菌屬,為革蘭氏陰性兼性厭氧桿菌,是一種條件致病菌。當宿主機體狀態改變或細菌進入腸道以外的部位,可引起呼吸道、泌尿生殖道、血液等感染,也是老年人感染或院內獲得性肺炎的常見致病菌。產氣腸桿菌可以產生B一內酰胺酶,多年來由于抗生素的濫用,該類細菌引起醫院感染的概率不斷上升,已成為院內感染常見的條件致病菌。
產氣腸桿菌PCR試劑盒具有以下優點:
1、本發明采用基因克隆技術,將產氣腸桿菌Cad基因片段插入到載體pMD18-T中,獲得含有Cad基因片段的重組質粒,以此作為標準品。根據產氣腸桿菌Cad基因片段編碼基因序列設計并合成一組特異性引物和探針,優化PCR反應條件,建立以實時熒光定量聚合酶鏈反應為平臺的檢測方法,并對所建立的方法進行評估。
2、本發明通過提取產氣腸桿菌的基因組DNA,結合實時熒光定量PCR檢測技術,可達到準確定量待測標本中產氣腸桿菌含量的目的,對判斷產氣腸桿菌活性菌的含量以及后續研究泌尿道感染具有重要意義。
3、本發明快速、靈敏、特異性好。
產氣腸桿菌PCR試劑盒的檢測流程:
檢測樣品前處理
1、食品樣品的直接檢測:樣品處理參考國標GB/T 4789.5-2012進行。以無菌操作取檢樣25g(mL),加入裝有滅菌225mL志賀氏菌增菌肉湯的均質杯,用旋轉刀片式均質器以8 000 r/min~10 000 r/min均質;或加入裝有225mL志賀氏菌增菌肉湯的均質袋中,用拍擊式均質器連續均質1 min~2 min,液體樣品振蕩混勻即可。于41.5 ℃±1℃,厭氧培養16 h~20 h。
2、疑似菌落檢測:直接用接種環或者無菌TIP頭挑去肉眼可見的菌團,配成1×、10×兩個梯度稀釋液,分別在PCR管中按照以下步驟擴增。